مواد

• اقدامات
• اشارے
• انتباہ
• ضروری سامان

گرام داغدار ایک تیز طریقہ کار ہے جو ٹشو کے نمونوں میں بیکٹیریا کی موجودگی کی نشاندہی کرنے اور سیل کی دیواروں کی کیمیائی اور جسمانی خصوصیات کی بنیاد پر گرام مثبت یا گرام منفی جیسے بیکٹیریا کی خصوصیات کے لئے استعمال ہوتا ہے۔ یہ داغدار بیکٹیریل انفیکشن کی تشخیص میں پہلے قدم کے طور پر ہمیشہ رہنا چاہئے۔

اس طریقہ کار کا نام ڈنمارک کے سائنس دان ہنس کرسچن گرام (1853 - 1938) کے نام پر رکھا گیا ، جس نے 1882 میں یہ تکنیک تیار کی اور اسی طرح کی علامتی علامات والے دو قسم کے بیکٹیریا کے درمیان فرق کرنے کے عمل کے طور پر 1884 میں شائع کیا: اسٹریپٹوکوکس نمونیہ (جسے نیوموکوکس بھی کہا جاتا ہے) اور کلبیسلا نمونیا.

اقدامات

حصہ 1 کا 3: سلائیڈ کی تیاری

1. 

   
   
   لیب کے کام کے ل ready تیار ہوجائیں۔ نمونے کو جانچنے سے بچنے کے لئے دستانے لگائیں اور لمبے لمبے بالوں کو باندھ لیں۔ کیمیائی دھوئیں کے ہوڈ کے تحت یا کسی اور اچھی طرح سے ہوادار علاقے میں کسی ورک اسپیس کو جراثیم سے پاک کریں اور دیکھیں کہ آپ کے شروع ہونے سے پہلے بونسن برنر اور خوردبین کام کررہے ہیں۔

2. 

   شیشے کے خوردبین سلائیڈ کو جراثیم سے پاک کریں۔ اگر بلیڈ گندا ہے تو چکنائی اور گندگی کو دور کرنے کے لئے اسے صابن اور پانی سے دھویں۔ ایتھنول ، شیشے کے کلینر یا آپ کے لیبارٹری کے ذریعہ تجویز کردہ طریقہ کا استعمال کرکے اسے جراثیم سے پاک کریں۔

3. 

   
   
   نمونہ سلائیڈ پر رکھیں۔ آپ پیٹری ڈش میں پائے جانے والے طبی نمونے یا بیکٹیری ثقافتوں میں موجود بیکٹیریا کی شناخت میں مدد کے لئے گرام داغ طریقہ استعمال کرسکتے ہیں۔ طریقہ کارآمد ہونے کے ل a ، ایک پرت رکھیں پتلا داغ پر نمونے کے. یہ تجویز کی جاتی ہے کہ 24 گھنٹے سے بھی کم پرانے نمونے کا استعمال کریں ، کیونکہ بوڑھے بیکٹیریا میں سیل کی دیواریں خراب ہوسکتی ہیں جو اس عمل کے بارے میں کم پیش گوئی کرتے ہیں۔
   • اگر آپ ٹشو نمونے استعمال کرنے جارہے ہیں تو ، سلائیڈ پر ایک سے دو قطرے ڈالیں اور یکساں طور پر پھیلائیں تاکہ دوسرا جراثیم سے پاک شیشے کی سلائیڈ کا استعمال کرکے ٹھیک داغ بن جائے۔ جاری رکھنے سے پہلے خشک ہوا جانے دیں۔
   • اگر آپ پیٹری ڈش سے بیکٹیریا استعمال کررہے ہیں تو ، بونسن برنر میں ٹیکہ لوپ کو جراثیم سے پاک کردیں یہاں تک کہ یہ چمک اٹھے اور پھر اسے ٹھنڈا ہونے دیں۔ اس کا استعمال سلائیڈ پر آست شدہ پانی کی ایک بوند کو لگائیں اور پھر بیکٹیریا کا ایک چھوٹا سا نمونہ منتقل کرنے اور پانی میں آہستہ سے مکس کرنے سے پہلے ہینڈل کو جراثیم سے پاک اور خشک کردیں۔
   • شوربے میں موجود جراثیم کو شاکر پر ملا دینا چاہئے اور پھر اوپر کی طرح ٹیکہ لوپ کے ساتھ مزید پانی شامل کیے بغیر شامل کرنا چاہئے۔
   • اگر آپ کے پاس جھاڑو کا نمونہ ہے تو ، جھاڑو کو بلیڈ کے نیچے آہستہ سے رول کریں۔

4. 

   
   
   گرمی کا استعمال کرتے ہوئے داغ درست کریں۔ گرمی سلائڈ پر موجود بیکٹیریا کو ٹھیک کردے گی تاکہ داغ کے دوران انہیں آسانی سے دھویا نہیں جاسکتا۔ بونس برنر کے شعلے میں دو یا تین بار جلدی سے بلیڈ کو منتقل کریں یا اسے بجلی کے بلیڈ ہیٹر پر گرم کریں۔ اس سے زیادہ نہ کریں ، یا آپ نمونے کو مسخ کرسکتے ہیں۔ اگر بونسن برنر استعمال کررہا ہے تو ، شعلہ چھوٹا ، نیلے رنگ کا شنک ہونا چاہئے ، لمبا ، سنتری کا شعلہ نہیں ہونا چاہئے۔
   • متبادل کے طور پر ، آپ خشک داغ میں میتھانول کے ایک سے دو قطرے شامل کرکے ، اضافی مصنوع کو نکال کر اور اسے خشک ہوا میں جانے کی وجہ سے داغ کو ٹھیک کرسکتے ہیں۔ یہ طریقہ کلینر پس منظر دیتے ہوئے میزبان خلیوں کو ہونے والے نقصان کو کم کرتا ہے۔

5. 

   داغ لگانے والی ٹرے پر سلائیڈ رکھیں۔ اس میں ایک فلیٹ دھات ، گلاس یا پلاسٹک کی پلیٹ ہوتی ہے جس کے ساتھ اوپر پر ایک چھوٹی اسکرین یا وائر سپورٹ ہوتا ہے۔ اس مدد پر بلیڈ رکھیں تاکہ آپ جو مائعات استعمال کرتے ہو ٹرے میں جاسکیں۔
   • اگر آپ کے پاس رنگنے والی ٹرے نہیں ہے تو ، سلائیڈ براہ راست پلاسٹک کی برف کی چادر پر رکھی جاسکتی ہے۔

حصہ 2 کا 3: گرام داغ کرنا

1. 

   جینٹین وایلیٹ سے داغ بھگو دیں۔ جینیاتی وایلیٹ کے کئی قطروں کے ساتھ بیکٹیریا کے نمونے بھگانے کے لئے پپیٹ استعمال کریں ، جسے کبھی کبھی کرسٹل وایلیٹ یا میتھائل وایلیٹ بھی کہا جاتا ہے۔ 30 سے ​​60 سیکنڈ تک انتظار کریں۔ Gentian وایلیٹ سیوی + اور کلورین (CL–) تشکیل کرتے ہوئے آبی حلوں میں الگ ہوجاتا ہے۔ یہ آئن گرام مثبت اور گرام منفی خلیوں کی دیوار اور جھلی میں گھس جاتے ہیں۔ سی وی + آئن بیکٹیریل خلیوں کے منفی چارج شدہ اجزاء کے ساتھ ان کو جامنی رنگ کے رنگنے کے لئے بات چیت کرتے ہیں۔
   • بارش کو روکنے کے ل Many بہت سے لیبارٹریز امونیم آکسالیٹ کے ساتھ جننیت وایلیٹ استعمال کرتی ہیں۔

2. 

   جننٹی وایلیٹ آہستہ سے کللا کریں۔ بلیڈ کو جھکائیں اور بلیڈ کے اوپر تھوڑا سا نل یا آست پانی ڈالنے کے لئے سپلیش کا استعمال کریں۔ پانی داغ کی سطح سے گزرنا چاہئے ، لیکن اس پر براہ راست نہیں ڈالا جانا چاہئے۔ گرام مثبت بیکٹیریا داغدار ہونے سے بچنے کے لئے زیادہ کللا نہ کریں۔

3. 

   داغ آئوڈین سے بھگو کر کللا دیں۔ آئوڈین سے داغ ڈھانپنے کے لئے پپیٹ استعمال کریں اور اسے کم از کم 60 سیکنڈ تک کام کرنے دیں۔ پھر اسی طریقے سے احتیاط سے کللا کریں۔ آئوڈین ، منفی چارج شدہ آئنوں کی شکل میں ، سیل + اندرونی اور بیرونی تہوں میں جینیاتی وایلیٹ اور آئوڈین (سی وی - I کمپلیکس) کے بڑے احاطے تشکیل دینے کے لئے ، سی وی + سے بات چیت کرتا ہے ، جہاں کہیں بھی وایلیٹ کے رنگ کو پھنس جاتا ہے۔
   • آئوڈین سنکنرن ہے۔ سانس ، غذا اور جلد سے رابطہ سے پرہیز کریں۔

4. 

   ایک بلیچ شامل کریں اور جلدی سے کللا کریں۔ اس اہم اقدام کے لئے ایسیٹون اور ایتھنول کا 1 سے 1 مرکب اکثر استعمال ہوتا ہے ، جس کا احتیاط کے ساتھ وقت ہونا ضروری ہے۔ بلیڈ کو کسی زاویے پر تھامیں اور بلیچ شامل کریں جب تک کہ وایلیٹ اب باہر آنے والے مائع میں نظر نہیں آتا ہے۔ عمل عام طور پر 10 سیکنڈ یا اس سے بھی کم وقت میں لیتا ہے ، اگر بلیچ میں ایسیٹون کی زیادہ مقدار ہوتی ہے۔ فوری طور پر رکنا یا بلیچ ٹیسٹ کو دوبارہ بنانے کے ، مثبت اور منفی خلیوں سے جینیاتی بنفشی داغ کو ختم کردے گا۔ پچھلی تکنیک کا استعمال کرتے ہوئے فورا. کللا کریں۔
   • مرکب کی جگہ پر خالص ایسیٹون (> 95٪) استعمال کیا جاسکتا ہے۔ جتنی زیادہ ایسیٹون ، بلچ تیز ہوجائے گی ، وقت کے زیادہ عین مطابق کنٹرول کی ضرورت ہوگی۔
   • اگر آپ کو یہ مرحلہ طے کرنے میں پریشانی ہو رہی ہے تو ، بلیو ڈراپ بذریعہ بلیوچ شامل کرنے پر غور کریں۔

5. 

   اس کے برعکس رنگنے سے داغ بھگو دیں اور کللا دیں۔ اس کے برعکس رنگ ، عام طور پر سفرینن یا فوچن ، رنگا رنگ (گرام منفی) گلابی یا سرخ بیکٹیریا رنگنے کے ذریعہ گرام مثبت اور گرام منفی بیکٹیریا کے درمیان اضافی تضاد شامل کرنے کے لئے استعمال ہوتا ہے۔ کم از کم 45 منٹ کے لئے چھوڑ دیں اور کللا کریں۔
   • فوسن بہت سے گرام منفی بیکٹیریا کو رنگ دے گا ، جیسے ہیمو فیلس ایس پی پی اور لیگیونیلا ایس پی پی، زیادہ شدت کے ساتھ ، یہ ابتدائ کے ل a ایک بہتر اختیار بنانا۔

6. 

   بلیڈ کو خشک کریں۔ آپ اسے اس مقصد کے لئے بکنے والے کاغذ کا استعمال کرکے ہوا میں خشک کرسکتے ہیں یا اسے تھپتھپا سکتے ہیں۔ گرام داغ ختم ہوچکا ہے۔

حصہ 3 کا 3: نتائج کی جانچ پڑتال

1. 

   آپٹیکل مائکروسکوپ تیار کریں۔ مائکروسکوپ کے نیچے سلائیڈ رکھیں۔ بیکٹیریا سائز میں بڑے پیمانے پر مختلف ہو سکتے ہیں ، لہذا مطلوبہ مجموعی اضافہ 400x سے لے کر 1000x تک ہوسکتا ہے۔ اعلی درجہ بندی کی اقدار پر ، یہ واضح کرنے کے لئے تیل میں ڈوبے ہوئے ایک معروضی لینس کو استعمال کرنے کی سفارش کی جاتی ہے۔ بلڈ پر وسرجن تیل کا ایک قطرہ رکھیں ، بلبلوں کو روکنے کے ل application درخواست کے دوران بہت زیادہ حرکتیں کرنے سے گریز کریں۔ مائکروسکوپ ریوالور منتقل کریں تاکہ مقصد کو لینس جگہ پر لے جا، ، تیل کو چھونے سے۔
   • تیل کے وسرجن کو صرف خصوصی لینسوں پر استعمال کیا جاسکتا ہے ، "خشک" لینز نہیں۔

2. 

   گرام مثبت اور گرام منفی بیکٹیریا کی شناخت کریں۔ خوردبین کے نیچے سلائڈ کا جائزہ لیں۔ جینیاتی وایلیٹ ان کی موٹی سیل کی دیواروں میں پھنس جانے کی وجہ سے گرام مثبت بیکٹیریا جامنی رنگ کے ہوں گے۔ گرام منفی سرخ یا گلابی ہوں گے ، کیونکہ بنفشی پتلی خلیوں کی دیواروں کے ذریعے دھویا جاتا تھا اور پھر گلابی برعکس رنگ ان کے اندر داخل ہوتا تھا۔
   • اگر نمونہ بہت گاڑا ہے تو ، آپ کو غلط مثبت نظر آ سکتے ہیں۔ اگر تمام قسم کے بیکٹیریا گرام پازیٹو ہیں تو ، نتیجے کی تصدیق کے ل another دوسرے نمونے کے ساتھ ٹیسٹ کو دہرائیں۔
   • اگر بلیچ بہت طویل عرصے سے کام کر رہا ہے تو ، آپ کو غلط منفی دیکھنے کو مل سکتی ہے۔ اگر تمام قسم کے بیکٹیریا گرام منفی ہیں تو ، نتیجہ کی تصدیق کے ل to دوسرے نمونے کے ساتھ ٹیسٹ کو دہرائیں۔

3. 

   حوالہ دینے والی تصاویر کے ل. دیکھیں اگر آپ کو یقین نہیں ہے کہ ایک جراثیم کی طرح لگتا ہے تو ، شکل کی شکل اور گرام داغ کے نتیجہ کے ذریعہ ترتیب دی گئی حوالہ امیجوں کا ایک مجموعہ دیکھیں۔ آپ آن لائن ڈیٹا بیس امریکی مائکروبیل پیتھوجین ڈیٹا بیس ، فوٹو بیکٹیریا فوٹو اور بہت ساری دوسری سائٹوں پر حاصل کرسکتے ہیں۔ شناخت کو آسان بنانے کے ل we ، ہم ذیل میں عمومی یا اہم مثالوں کی فہرست اور وضع کے مطابق تشخیص کرتے ہیں۔

4. 

   گرام مثبت بیکٹیریا کو ان کی شکل سے شناخت کریں۔ بیکٹیریا کو ان کی شکل سے خوردبین کے تحت درجہ بندی کیا جاتا ہے ، عام طور پر ناریل (کروی) یا بیسلی (بیلناکار) کے طور پر۔ یہاں کچھ عام گرام مثبت بیکٹیریا ہیں جو شکل کے لحاظ سے منظم ہیں:
   • گرام مثبت ناریل عام طور پر ہیں اسٹیفیلوکوسی (گروہوں میں ناریل) یا اسٹریپٹوکوسی (زنجیر ناریل)
   • گرام پازیٹو بیکیلی شامل کریں بیسیلس, کلوسٹریڈیم, کورین بیکٹیریم اور لیسٹریا. بیسیلی ایکٹینومیسیس ایس پی پی۔ اکثر شاخیں یا تنتہا ہوتے ہیں۔

5. 

   گرام منفی بیکٹیریا کی شناخت کریں۔ گرام منفی (گلابی) کو اکثر تین گروہوں میں درجہ بندی کیا جاتا ہے: ناریل دائرہ دار ہوتا ہے ، بیسیلی لمبی اور پتلی ہوتی ہے اور کوکائڈ بیسییلی درمیان میں ہوتی ہے۔
   • گرام منفی ناریل عام طور پر ہیں نیسیریا ایس پی پی۔
   • گرام منفی بیکیلی شامل کریں ای کولی, انٹروبیکٹر, کلیبسیلا, سائٹرو بیکٹر, سیرٹیا, پروٹیوس, سلمونیلا, شیگیلا, سیوڈموناس اور کئی دوسرے. جراثیم وبریو ہیضے یہ عام یا مڑے ہوئے بیسلی کی طرح نظر آسکتا ہے۔
   • گرام منفی کوکوڈ بیسلی (یا "کوکوباسیلی") شامل کریں بورٹیلا, بروسللا, ہیمو فیلس اور پیسٹریلا.

6. 

   ملے جلے نتائج کا اندازہ کریں۔ کچھ بیکٹیریا سیل کی دیواروں کی نزاکت یا موم کی شکل کی وجہ سے خاص طور پر رنگ لینا مشکل ہیں۔ ان میں ایک ہی سیل میں ارغوانی یا گلابی رنگ کا مرکب ہوسکتا ہے ، یا ایک ہی نمونے میں مختلف خلیوں کے درمیان۔ 24 گھنٹوں سے زیادہ عمر کے بیکٹیریا کے کسی بھی نمونے میں یہ مسئلہ ہوسکتا ہے ، لیکن کچھ پرجاتیوں کو کسی بھی عمر میں رنگ دینا مشکل ہوتا ہے اور شناخت کو کم کرنے کے ل more مزید مخصوص ٹیسٹوں کی ضرورت ہوتی ہے ، جیسے زیہل نیلسن تکنیک ، ثقافت کی نشوونما کا مشاہدہ ، TSI اگر یا جینیاتی جانچ۔
   • ایکٹینومیسیس, آرتوبیکٹر, کورین بیکٹیریم, مائکوبیکٹیریم اور پروپیون بیکٹیریم ایس پی پی۔ ان سب کو گرام پازیٹو بیکٹریا سمجھا جاتا ہے ، لیکن وہ اکثر اس ٹیسٹ کے حتمی نتائج نہیں برآمد کرسکتے ہیں۔
   • چھوٹے ، پتلی بیکٹیریا جیسے ٹریپونما, کلیمائڈیا اور رکیٹسیا ایس پی پی۔ اس تکنیک کا استعمال کرتے ہوئے رنگ ٹھیک کرنا مشکل ہے۔

7. 

   مواد سے چھٹکارا حاصل کریں۔ لیبارٹری اور استعمال شدہ مواد کے لحاظ سے کچرے کو ضائع کرنے کے طریقہ کار مختلف ہوتے ہیں۔ عام طور پر ، داغ والی ٹرے میں موجود مائع کو خطرناک فضلہ کے طور پر سیل شدہ بوتلوں میں خارج کردیا جاتا ہے۔ 10 ble بلیچ حل میں بلیڈ ڈوبیں اور پھر تیز ماد ofے کی تلفی کے ل contain انھیں کنٹینر میں پھینک دیں۔

اشارے

• یاد رکھیں کہ گرام داغ نتیجہ نمونے کی طرح اچھا ہے۔ یہ ضروری ہے کہ مریضوں کو اچھ samplesے نمونے ظاہر کرنے کے ل teach سکھائیں ، مثال کے طور پر تھوک کے نمونے میں تھوک اور گہری بلغم کے مابین فرق۔
• بلیچ کے طور پر ، ایتھنول ایسیٹون سے زیادہ آہستہ آہستہ کام کرتا ہے۔
• لیبارٹری کے معیاری احتیاطی تدابیر پر عمل کریں۔
• مشق کرنے کے لئے ایک جھاڑی کا نمونہ استعمال کریں ، کیوں کہ اس میں گرام پازیٹو اور گرام منفی بیکٹیریا ہونا چاہئے۔ اگر آپ صرف ایک ہی قسم کی دیکھتے ہیں تو ، آپ شاید بہت زیادہ یا بہت کم بلیچ استعمال کر رہے ہیں۔
• آپ بلیڈ لینے کے لئے موسم بہار سے بھری ہوئی لکڑی کے کپڑے کا استعمال کرسکتے ہیں۔

انتباہ

• ایسیٹون اور ایتھنول آتش گیر ہیں اور سابقہ ​​آپ کے ہاتھ سے تیل نکال دے گا ، اس سے آپ کی جلد دیگر کیمیائی اجزاء کو آسانی سے جذب کرسکتی ہے۔ لہذا ، دستانے پہنیں اور ہوشیار رہیں۔
• داغ یا داغ کللا کرنے سے پہلے نمونے کو خشک نہ ہونے دیں۔

ضروری سامان

• تانے بانے کا نمونہ
• گلاس سلائڈ
• پائپٹ
• شعلہ ، بلیڈ ہیٹر یا میتھانول کا ایک ذریعہ
• پانی
• Gentian وایلیٹ
• آئوڈین
• ایک بلیچنگ ایجنٹ ، جیسے شراب یا ایسیٹون
• سفرانینا